ELISA的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng)，并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的方法顯現(xiàn)出來(lái)。
首要進(jìn)程分為如下5個(gè)部分：
（1）將抗原抗體反應(yīng)固相化：即試驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié)，使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機(jī)制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無(wú)選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結(jié)構(gòu)，堅(jiān)持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性；
（2）封閉：固相吸附蛋白對(duì)錯(cuò)特異性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面依然有吸附其它蛋白的才干，為了確保抗原抗體反應(yīng)的特異性，因此，包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉。一般以為牛血清白蛋白是zui為志向的封閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
（3）抗原抗體反應(yīng)：抗原或抗體在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。
（4）酶反應(yīng)：酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體銜接構(gòu)成結(jié)合物，當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)分，被檢測(cè)靶政策中也結(jié)合了酶分子。
（5）底物反應(yīng)：結(jié)合在抗原抗體中的酶分子，可以促進(jìn)底物發(fā)生顏色反應(yīng)，檢測(cè)人員可以裸眼查詢，可以通過(guò)顏色來(lái)斷定是否有免疫反應(yīng)的存在，通過(guò)顏色的深淺判別標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量，也可借用酶標(biāo)儀在恰當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)讀取吸光度值。